К СБОРНИКУ МАТЕРИАЛОВ
Долматова Л.С., Ромашина В.В.,
* Дзуцев А.Х.
МОРФИН СТИМУЛИРУЕТ АПОПТОЗ ЛИМФОЦИТОВ НА ФОНЕ СНИЖЕНИЯ ИХ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ IN VITRO
Тихоокеанский океанологический институт ДВО РАН, Владивосток
*Институт иммунологии МЗ РФ, Москва
Морфин может вызывать иммуносупрессию не только через центральную нервную систему, но и прямым действием на иммунные клетки. По данным некоторых исследователей, такое его действие в моноцитах человека объясняется вызываемым им апоптозом, который опосредован NO-синтезом (Singhal et al., 1997). Нами были исследованы способность морфина увеличивать апоптоз в лимфоцитах периферической крови человека и возможная роль в развитии апоптоза антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионредуктазы (ГР). Т-лимфоциты крови доноров получали центрифугированием в градиенте фиколла-верографина с последующим отделением моноцитов и постановкой реакции розеткообразования с эритроцитами барана (Odlander et al., 1988). Клетки инкубировали с различными концентрациями морфина в течение 24 часов при 37 о С. Активность СОД измеряли по методу Nishikimi et al. (1972), активность ГР - по методу Юсуповой (1989). Жизнеспособность клеток определяли методом исключения трипанового синего, апоптоз - методом проточной цитометрии.
Жизнеспособность лимфоцитов к 24 часам инкубации не менялась по
сравнению с контролем при большинстве исследованных концентраций
морфина (10
-3-10
-6 М). При концентрации морфина 10
-9
М она даже возрастала, что, в определенной мере, согласуется с тем фактом,
что морфин в концентрациях, меньших, чем 10
-6 М, стимулирует
пролиферацию лимфоцитов ( Bian et al., 1995). Исследование влияния морфина
на апоптоз показало, что в первые 18 час инкубации морфин в
концентрациях 10
-4-10
-6 М снижал интенсивность
апоптоза по сравнению с контролем, а в концентрации 10
-3 М не
оказывал на него влияние. Лишь к 24 часам инкубации, несмотря на отсутствие
видимого снижения жизнеспособности клеток по сравнению с контролем, апоптоз
при действии морфина превышал контрольные значения, причем действие морфина
в диапазоне концентраций 10
-6-10
-3 М было дозозависимым,
с 90% уровнем апоптоза при концентрации морфина 10
-3 М. Измерение
активности СОД и ГР показало, что морфин в диапазоне концентраций 10
-1
0-10
-6 М через 1 час инкубации с лимфоцитами повышал активность
ГР концентрационно-зависимым образом, с выходом кривой активность-
концентрация морфина на плато в диапазоне концентраций 10
-6-10
-3
М. Активность СОД также увеличивалась с ростом концентрации морфина,
достигая 145% от уровня контроля при концентрации морфина 10
-4 М.
Но при концентрации морфина 10
-6 М она практически была равна
контрольной. Однако к 24 часам инкубации морфин (10
-6М) значительно
(на 80%) угнетал активность СОД, а активность ГР возвращалась к контрольному
уровню.
Таким образом, действие морфина на апоптоз лимфоцитов зависит не только от его концентрации, но и от времени инкубации с клетками. Стимуляция активности антиоксидантных ферментов морфином по времени соответствует снижению уровня апоптоза по сравнению с контролем и, напротив, начало проявления апоптотического действия морфина соотвествует снижению активности антиоксидантных ферментов, особенно, СОД. Возможность участия антиоксидантной системы в реализации механизмов апоптоза нуждается в дальнейшем изучении.