К СБОРНИКУ МАТЕРИАЛОВ
Долматова Л.С., Ромашина В.В.,
* Дзуцев А.Х.
ДОЗОЗАВИСИМОЕ ВЛИЯНИЕ МОРФИНА IN VITRO НА АПОПТОЗ ФАГОЦИТОВ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОЙ ГОЛОТУРИИ STICHOPUS JAPONICUS
Тихоокеанский океанологический институт ДВО РАН, Владивосток
*Институт иммунологии МЗ РФ, Москва
Изучение механизмов реагирования иммуноцитов беспозвоночных животных представляет интерес как в связи с необходимостью понимания эволюции иммунной системы, так и с перспективами использования иммунных клеток низших животных в моделировании иммунного ответа и получении лекарственных препаратов. Наличие морфиноподобных веществ в гемолимфе моллюска Mytilis edulis и рецепторов к морфину на поверхности иммуноцитов этого животного, сходных с таковыми на поверхности моноцитов человека (Stefano et al., 1993), позволяет предполагать важную роль этих веществ в регуляции иммунной системы и у других беспозвоночных. Иглокожие (Echinodermata), являясь одними из низкоорганизованных животных, занимают особое место среди беспозвоночных, так как, будучи вторичноротыми, имеют общего предка с позвоночными. Однако данные о роли морфина в регуляции иммунитета у этих животных практически отсутствуют. Целью данного исследования явилось изучение влияния морфина на апоптоз фагоцитов дальневосточной голотурии Stichopus japonicus.
Фагоциты (амебоциты) голотурий получали центрифугированием в растворе 0,8 М сахарозы по методу Edds (1977). Чистота фракции, определенная микроскопическим исследованием окрашенных метиленовой синью мазков, составила 92-95 %. Клетки инкубировали при 25оС в течение 18 час с различными концентрациями морфина и адреналином (10-6 М) . Определяли жизнеспособность фагоцитов по исключению трипанового синего, апоптоз - методом проточной цитометрии.
Жизнеспособность полученных клеток составила 90-97 %. 18-часовая инкубация при 25оС приводила к значительному снижению жизнеспособности клеток - до 55 %, при этом доля апоптотических клеток возрастала в 1,5 раза. 18-часовая инкубация клеток с морфином в концентрации 10-6 М не приводила к достоверному изменению жизнеспособности фагоцитов (для сравнения, адреналин в этой же концентрации вызывал двукратное снижение жизнеспособности клеток), а в концентрациях 10-9 и 10-3 М морфин даже повышал жизнеспособность клеток в 1, 5 раза. При этом морфин в концентрациях 10-6 и 10-3 М снижал уровень апоптоза фагоцитов по сравнению с контролем на 26 % и 52 %, соответственно.
Таким образом, апоптоз, по-видимому, играет важную роль в механизмах гибели фагоцитов голотурии Stichopus japonicus, и морфин в первые часы инкубации с клетками защищает их от апоптоза. Близкие результаты получены нами ранее на лимфоцитах человека, в которых морфин оказывал апоптотическое действие только после 24 час инкубации, а в первые восемнадцать часов, напротив, снижал апоптоз. Это указывает на наличие сходных механизмов в регуляции морфином активности иммунных клеток человека и голотурии Stichopus japonicus и позволяет предполагать возможность использования последних для изучения этих механизмов.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект N 00-04-48949).