Опубликовать статью

Информационное партнерство

Инфоресурсы

Контакты

ТОМ 2, СТ. 49 (сc. 223-297) // 28-31 мая 2001 г.,

Юбилейная X Конференция "Нейроиммунология"

---

Введение.
Ряд нейротропных вирусов после интраназального введения обладают способностью проникать в ЦНС через нервные окончания локализующиеся в носовой полости. К этим патогенным агентам относятся ВВС, вирус бешенства, вирус гепатита мышей, вирус псевдобешенства и вирус простого герпеса 1 типа. Характер и механизмы внедрения и распространения в организме этих вирусов различны. Так после интраназального заражения вирус гепатита мышей проникает в ЦНС только через обонятельный нерв, а вирус бешенства для инфицирования использует обонятельный и тройничный нервы. Использование модельных систем позволяет исследовать различные аспекты острых вирусных нейроинфекций. В качестве такой модели был использован ВВС. ВВС имеет одноцепочечную РНК и относится к семейству рабдовирусов, включающему вирус бешенства и различные вирусы патогенные для животных и растений. В естественных условиях ВВС вызывает у крупного рогатого скота нелетальные везикулярные эпидермоидные поражения. Однако, интраназальное заражение мышей приводит к развитию энцефаломенингита, параличей, вентрикулита и высокой смертности..

Цель и задачи исследования.
Исследовать репликацию ВВС в нейроэпителии носовой полости и ранние этапы проникновения вируса в ЦНС.

Материалы и методы.
В работе использовался ВВС серотип Индиана, выращенный на клетках яичника китайского хомячка и очищенный на градиенте сахарозы. Мышей BALB/c 5-7 недельного возраста интраназально заражали ВВС в дозе 105 БОЕ, 5 мкл в левую ноздрю. В различные интервалы времени после заражения мыши получали летальную дозу фенобарбитала, немедленно проводилась внутри кардиальная перфузия физиологическим раствором с последующей фиксацией параформальдегидом. После декальцификации костей черепа на криостате готовились фронтальные срезы толщиной 22 мкн различных отделов носовой полости и переднего отдела головного мозга. Вирусные антигены выявлялись иммуногистохимическим методом с помощью гипериммунной сыворотки овцы, содержащей антитела ко всем белкам ВВС, с последующей визуализацией авидин-биотиновым методом с использованием Vector ABC kit.

Основные результаты.
Получены данные о анатомическом и временном распространении ВВС в структурах носовой полости и переднем головном мозге мышей в ранние сроки после заражения. ВВС инфицирует сенсорные нейроны нейроэпителия носовой полости и быстро начинает реплицироваться. В пределах 6 часов после инфекции антигены ВВС обнаруживаются в дендритах, аксонах и телах биполярных нейронов обонятельного эпителия. В этот период большинство нейронов и мембрана (lamina propria) нейроэпителия оставались интактными. Через 12 часов после заражения ВВС захватывал уже целые зоны нейроэпителия. Антигены ВВС обнаруживались в нейронах, поддерживающих и базальных клетках. Причем инфицированные базальные клетки выявлялись как под пораженным нейроэпителием, так и в соседних участках не измененного нейроэпителия. ВВС проникал в волокна обонятельного нерва и другие структуры мембраны. Отмечалось в пораженных участках нарушение анатомической целостности поверхности эпителиального слоя. К 24 часам после заражения антигены ВВС обнаруживались во всех типах клеток обонятельного эпителия, мембраны и железах Боумена. Отмечались цитолитические изменения в нейроэпителии и интенсивное окрашивание на антигены ВВС наружной поверхности слизистой оболочки. Массивное инфицирование обонятельного эпителия протекало на фоне практически интактного респираторного эпителия. Граница между зараженным обонятельным нейроэпителием и неинфицированным респираторным эпителием была ярко выраженной. К этому времени ВВС проникал в структуры головного мозга. Антигены ВВС содержались в слое обонятельного нерва и в отдельных гломерулах обонятельной луковицы головного мозга мышей. Следует отметить, что в этот период ВВС поражал только левую сторону носовой полости и левую обонятельную луковицу мозга. Не инфицированная правая часть носовой полости оставалась интактной.
До интраназального заражения ВВС обработка мышей Тритоном Х-100, который разрушает зрелые обонятельные нейроны и не влияет на клетки базального слоя, не препятствовала проникновению вируса в ЦНС. Билатеральная хирургическая балбектомия разрушающая путь инфицирования ВВС через обонятельный нерв не препятствовала проникновению ВВС в различные отделы головного мозга. При исследовании тройничного ганглия на 3 день после интраназального заражения мышей не выявило в данной структуре вирусных белков. Данные исследования показали, что ВВС вначале инфицирует биполярные клетки нейроэпителия, а затем поражает близлежащие поддерживающие и базальные клетки. Отмечается высокий тропизм ВВС в отношении базальных клеток. ВВС использует как ретроградный, так и антероградный нейрогенный путь для внедрения в ЦНС. ВВС также обладает способностью проникать в ЦНС используя базальные и не нейронные клетки. ВВС не использует тройничный нерв для инфицирования ЦНС и не поражает клетки респираторного эпителия.