Опубликовать статью

Информационное партнерство

Инфоресурсы

Контакты

ТОМ 9, СТ. 6 (стр. 49-62) // февраль 2008 г.

Получение синтетических генов для молекулярно-биологических исследований на примере человеческого плацентарного ингибитора рибонуклеаз

С.А.Хаустов, Н.И.Матвиенко, Л.А.Железная
Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино; Институт белка РАН, Пущино

---

(статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader)

Резюме:
Нуклеотидная последовательность гена плацентарного ингибитора рибонуклеаз оптимизирована для экспрессии в Escherichia coli; для получения гена разработана новая стратегия химико-ферментативного синтеза ДНК. Экспрессия полученного гена позволила добиться продукции активного белка примерно в 4 раза выше, чем при экспрессии нативного гена. Для получения функционально чистого препарата белка разработана новая схема хроматографической очистки без применения иммобилизованной рибонуклеазы. Оптимизация структуры искусственного гена позволяет экспрессировать его как в E.coli, так и в эукариотических системах.

Ключевые слова: ингибитор рибонуклеаз, химико-ферментативный синтез генов, кодоновый состав, рекомбинантная экспрессия, очистка белков.


SYNTHETIC GENES FOR MOLECULAR BIOLOGY BY THE EXAMPLE OF HUMAN PLACENTAL RIBONUCLEASE INHIBITOR'S GENE

Khaustov S. A.1, Matvienko N. I.2, Zheleznaya L. A.1

Institute of Theoretical and Experimental Biophysics RAS, Pushchino
Institute of Protein Research RAS, Pushchino

Summary:
In this paper we suggest a new approach for chemical synthesis of genes. The human placental ribonuclease inhibitor's gene was obtained by this method. The nucleotide sequence optimisation for expression in Escherichia coli allows to achieve about 4-fold higher yield of protein than in case of native gene. New chromatographic purification strategy without using of immobilized ribonuclease was developed for the protein purification. Gene optimization allows to improve expression both in E.coli and in eucaryotic systems.

Keywords: ribonuclease inhibitor, chemical synthesis of genes, codon usage, expression of recombinant proteins, protein purification.