Опубликовать статью

Информационное партнерство

Инфоресурсы

Контакты

ТОМ 8, СТ. 18 ( стр. 169-183 ) // март 2007 г.

N гос. регистрации: 0420700002\0018

Определение полиароматических углеводородов в продуктах питания и объектах окружающей среды методом поляризационного флуоресцентного иммуноанализа

А.Ю.Лобанова, Е.А.Шуталева, И.Ю.Горячева, С.А.Еремин, М.Сучанек, Р.Нисснер, Д.Кнопп
Xимический факультет, Московский государственный университет им.М.В.Ломоносова, Россия.
Институт гидрохимии, Технический университет г.Мюнхен, Германия

---

( статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader )

Тезисы

Полиароматические углеводороды (ПАУ) - класс органических соединений, для которых характерно наличие в химической структуре двух и более конденсированных бензольных колец. В продуктах питания и объектах окружающей среды встречаются до 16 таких соединений ПАУ, которые классифицируются как приоритетные загрязнители. В настоящее время ПАУ определяют методоми ГЖХ или ВЭЖХ. Эти методы продолжительны во времени и малопроизводительны, требуют дорогостоящего оборудования, трудоемкой пробоподготовки образцов (очистка, концентрирование и дериватизация) и большого количества органических растворителей и других реагентов. Поэтому для быстрого скрининга ПАУ необходимо разрабатывать другие аналитические методы. Иммуноферметный анализ (ИФА) и флуоресцентный поляризационный иммуноанализ (ФПИА) становятся все более часто используемыми методами, которые дополняют хроматографические методы для скрининга большого числа загрязнителей. ФПИА это метод конкурентного иммуноанализа, который основан на возрастании поляризации флуоресценции небольших флуоресцеин-меченных молекул антигена (трейсеров) при их взаимодействии с специфическими антителами. Если в тестируемом образце содержится немеченный аналит, то трейсер будет конкурировать с ним за связывание с антителами и значение поляризации флуоресценции будет уменьшаться. Для выполнения ФПИА необходимо к тестируемому образцу (обычно 10-50 мкл) просто добавить растворы трейсера и антител, перемешать и измерить аналитический сигнал. Поляризация флуоресценции реакционной смеси измеряется в течении нескольких секунд. Общее время для проведения анализа составляет от секунд до нескольких минут в зависимости от испольуемых пипеток и прибора для измерения поляризации флуоресценции. В данной работе были синтезированы флуоресцеин-меченные трейсеры для различных ПАУ и разработаны методики ФПИА с использованием моноклональных и поликлональных антител. Пределы обнаружения ПАУ для бензопирена, нафталина и антрацена были 0.9, 1.1 и 3.4 нг/мл, соответственно. Метод ФПИА может быть использован для быстрого скрининга продуктов питания и объектов окружающей среды на загрязнение ПАУ.

Ключевые слова: полиароматические углеводороды, поляризационный флуороиммуноанализ, экологический мониторинг, контроль продуктов питания

Abstract

Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are a class of organic compounds consisting two or more condensed aromatic rings in chemical structure. Sixteen representatives of PAHs are generally determined in environmental and food samples and were classified as priority pollutants. Present-day standard methods for the PAHs determination are gas chromatography or high performance liquid chromatography. These techniques are time consuming and low throughput screening; require expensive instrumentation, extensive sample pre-treatment (purification, pre-concentration and derivatization) and large amounts of organic solvents and other chemicals. Thus, the development of analytical methods for rapid screening of PAHs would be very helpful. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Fluorescence Polarization Immunoassay (FPIA) are now being increasingly recognized as valuable complementary techniques for the screening of environmental contaminants. FPIA is competitive immunoassay and based on the increase in the fluorescence polarization of a small fluorescent-labeled antigen (tracer) when bound by specific antibody. If the sample contains unlabeled analyte, tracer will compete for binding with antibody and the fluorescence polarization signal will fall. To performance FPIA only the tracer and the antibody solutions must be added to aliquot of liquid sample (typically 10-50 µl), mixed and measured the analytical signal. The fluorescence polarization of reaction mixture could be measured in few seconds. The total time required for an assay is seconds or few minutes in depends of used pipettes and fluorescence polarization instrument. The fluorescein-labeled tracers based on different PAHs were synthesized and FPIA using both monoclonal and polyclonal antibodies for detection of PAHs was developed. The limits of detection of PAHs were 0.9, 1.1, and 3.4 ng/mL for benzo[a]pyrene, naphthalene and anthracene, respectively. The developed FPIA could be used for rapid screening of environmental and food samples for contamination with PAHs.