|
|
|
ТОМ 5, СТ. 78 (стр. 231-234) // Июнь 2004
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЕРФТОРУГЛЕРОДОВ ДЛЯ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ПРОЦЕССОВ МИКРОБНОЙ ДЕГРАДАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ НА ПРИМЕРЕ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
М.К. Бакулин, Е. В. Чеботарев, А. С. Кучеренко
Вятский государственный университет, Киров
Нефть относится к наиболее интенсивно используемым природным полезным ископаемым. Процессы добычи, транспортировки, переработки нефти и использования нефтепродуктов часто сопровождаются технологическими и аварийными выбросами их во внешнюю среду, что приводит к загрязнению и нарушению экосистем различной интенсивности, вплоть до экологических катастроф. Площади нефтезагрязненных земель и водоемов с каждым годом увеличиваются, поэтому продолжает оставаться актуальной проблема разработки новых и совершенствования существующих технологий ликвидации последствий техногенных контаминаций нефтью и нефтепродуктами и восстановления биопотенциала нарушенных экосистем [1].
Экономический эффект, получаемый в результате реабилитации природного потенциала при очистке от нефтяных загрязнений одного гектара земли, изымающейся из пользования в результате аварийных выбросов нефтепродуктов, составляет несколько десятков тысяч долларов (в зависимости от структуры землепользования, для пахотных земель - 30000 долларов, для пастбищных и сенокосов - 200000 долларов, для промышленных районов - 2335000 долларов) [2].
В последние годы появилось много публикаций об эффективном использовании микроорганизмов для удаления экотоксикантов на основе нефти [2 - 4]. Механизмы микробной биодеструкции нефти и нефтепродуктов самые разнообразные: от биотрансформации под воздействием разнообразных ферментов, до полной утилизации и использования в качестве источника углерода и энергии. С учетом таких способностей микроорганизмов был предложен метод биокоррекции загрязнений, который включает в качестве основных подходов биостимуляцию - активацию деградирующей способности аборигенной микрофлоры почвы или воды, путем внесения биогенных элементов, и биодополнение - интродукцию в загрязненные нефтепродуктами очаги специализированных микроорганизмов.
Основные преимущества микробиологической деструкции перед другими методами заключаются: в более полной степени очистки, экологической безопасности, относительной дешевизне, возможности постоянной обработки "хронических" загрязнений и возможности использования в зонах труднодоступных для выемки грунтов.
Еще недавно предполагалось, что микроорганизмы, способные разлагать и использовать углеводороды нефти и нефтепродуктов, встречаются только там, где расположены нефтепромыслы, нефтехранилища или нефтепроводы, т. е. только там, где имеются источники постоянного загрязнения ими внешней среды. Однако, согласно современным данным, такие микроорганизмы распространены очень широко и могут быть выделены из любой луговой, лесной, полевой почвы [2-4]. Кроме того, способность использовать нефть в качестве источника энергии присуща не только конкретным специализированным формам микробов, а широкому кругу бактерий и микроскопических грибов.
К биодеструкторам нефтепродуктов относят значительное число микроорганизмов представителей разных таксономических групп: псевдомонад, бацилл, родококков, микобактерий, дрожжевых микромицетов и других микробов. Всем этим микроорганизмам при росте на углеводородах нефтепродуктов крайне необходим кислород.
Предельные скорости транспорта кислорода в средах, содержащих высокие концентрации углеводородов, часто остаются недостаточными в отношении микроорганизмов нефтедеструкторов, что существенно ограничивает скорость и степень биодеградации нефти и нефтепродуктов. С учетом этого нами было использовано внесение в среды разных концентраций перфторорганического соединения (ПФОС) с газотранспортной функцией - перфтордекалина. При этом ПФОС нас заинтересовали из-за своей химической устойчивости и большой способности растворять газы. Известно, что они растворяют до 40-50 об. % кислорода и до 150-200 об. % углекислого газа и способны доставлять их клеткам и тканям организма [5].
Цель данной работы заключалась в экспериментальном обосновании перспективности использования перфторорганических соединений с газотранспортной функцией для ускорения процессов биодеградации нефти и выращивания микроорганизмов биодеструкторов на синтетических средах содержащих только воду, соли, а в качестве источника углерода и энергии нефть или нефтепродукты, что позволяет адаптировать биодеструкторы для интродукции в места нефтезагрязнений.
В качестве биодеструкторов нефтепродуктов были использованы выделенные сотрудниками лаборатории микробиологии ВятГУ культуры углеводородокисляющих бактерий родов Pseudomonas, Rodococcus и Bacillus [6]. Характеристика основных культурально-морфологических свойств использованных штаммов представлена в табл. 1.
Таблица 1. Свойства штаммов бактерий биодеструкторов
Штамм
|
Характеристика клеток
|
Характеристика колоний
|
Отношение к кислороду
|
Форма
|
окраска по Граму
|
Подвижность
|
форма
|
цвет
|
Pseudomonas putida
ВУ186
|
Палочки с закруглен- -ными
концами
|
Г-
|
Подвижны
|
Круглые, выпуклые, край ровный
|
Светло- серый или кремовый
|
Аэробы
|
Rhodococcus
erythropolis
ВУ 321
|
Палочко- -видные, закруглен- -ные концы
|
Г+
|
Неподвижны
|
Круглые, выпуклые, край ровный
|
Бледно-бежевые
|
Аэробы
|
Bacillus
subtilis
ВУ 367
|
Палочки с закруглен- -ными
концами
|
Г+
|
Подвижны
|
Круглые, выпуклые, край ровный
|
Белые или светло серые
|
Факультативные анаэробы
|
Для выращивания углеводородокисляющих микроорганизмов, использовали синтетическую минеральную среду следующего состава (г/л): аммоний фосфорнокислый однозамещенный - 9,0; натрий фосфорнокислый однозамещенный - 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный - 10,0; кальция хлорид - 0,04; магний сернокислый семиводный - 0,7; железо сернокислое семиводное - 0,013; цинк сернокислый семиводный - 0,012; марганец сернокислый семиводный - 0,012; воды водопроводной до 1 дм 3, рН среды 6,9+0,1. Навески солей растворяли в воде раздельно и смешивали после стерилизации в асептических условиях, затем доводили рН среды до заданных значений.
В стерильные колбы Эрленмейера емкостью 250 см 3 вносили: навески 0,5 г (1 % по массе) нефти или мазута; 0,5 или 2,5 см 3 перфтордекалина (1 и 5,0 об.%); культуру одного из микроорганизмов биодеструкторов в объеме 1 см 3 с концентрацией 5.109 бактерий/см 3 по оптическому стандарту мутности (ОК), а затем готовой синтетической средой доводили общий объем рабочей смеси до 50 см 3 (до конечной концентрации в рабочей суспензии 1.108 живых бактерий в 1 см 3 по ОК). Одновременно ставили контрольные опыты с колбами, в которых отсутствовал один из исследуемых компонентов: нефтепродукт, культура микроорганизмов или перфтордекалин, а также определяли биологическую концентрацию (количество живых) бактерий в среде путем высева серийных разведений культуры на плотную среду на основе мясопептонного агара.
Колбы помещали на шуттель, выращивание культур вели в течение 4 суток при (29+2)°С и 250 оборотах в минуту. Для сравнения характера роста бактерий при нормальном углеводном питании с культурой Pseudomonas putida ВУ186 был поставлен эксперимент, когда в жидкую синтетическую среду вместо нефтепродуктов добавили стерильный раствор глюкозы до конечного содержания ее в среде 0,5 г (1%).
Количественное определение нефтепродуктов в среде после культивирования проводили гравиметрическим (весовым) методом. Метод достаточно прост, не требует сложного дорогостоящего оборудования. Недостатком метода считается относительно большая погрешность при обнаружении легких фракций углеводородов. Для преодоления этого недостатка, в схему анализа была включена контрольная проба, представляющая собой смесь питательной среды с эквивалентным количеством нефтепродукта и проводимая по режиму опытных проб, но без добавления микробного инокулята. Во время выращивания каждые 24 часа и после окончания процесса отбирали пробы объемом 0,2 мл для определения количества живых бактерий методом серийных разведений с высевом на плотную питательную среду на основе мясопептонного агара.
После завершения процесса выращивания с помощью делительной воронки извлекали перфтордекалин и проводили экстракцию остатков нефтепродуктов хлороформом (25 см 3 на весь объем среды) на шуттеле в течение 20 минут и последующей 8:10 часовой экспозицией.
Экстракты, отделяли на делительной воронке, сушили прокаленным сульфатом натрия в течение 30-40 мин., после чего отгоняли растворитель на водяной бане при температуре (75:80)°С. Пары растворителя конденсировали в холодильнике, а сам растворитель собирали в приемник. Полученные остатки после отгонки растворителя помещали в сухожаровой шкаф и при температуре (80:85)°С выпаривали до постоянной массы. Пробы после охлаждения взвешивали с точностью до 0,0001 г и рассчитывали содержание нефтепродуктов. Данные анализа массы остатков нефтепродуктов в опытной и контрольной пробах использовались для расчета степени биологической утилизации (БУ) исследуемой культурой микроорганизмов нефти и мазута по формуле:
БУ = (Мк-Мо)/Мк * 100 % , (1)
где Мк - масса нефтепродукта в исходной (контрольной) пробе (среднее арифметическое параллельных определений);
Мо - масса остатка нефтепродукта в опытной пробе (среднее арифметическое параллельных определений).
Биодеструктивную активность культур оценивали с учетом прироста количества микроорганизмов в культуральной среде и степени биологической утилизации нефтепродуктов (табл. 2-7).
Результаты экспериментов, представленные в табл. 2-7 свидетельствуют, что при отсутствии в синтетической среде углеводородов рост всех культур микроорганизмов отсутствовал, при этом первые 24-48 концентрация микроорганизмов держалась на исходном или близком к нему уровне, а затем наступало интенсивное отмирание бактерий. Внесение в среду нефти или мазута сопровождалось 6-11 кратным увеличением количества бактерий через 72-96 часов культивирования. При этом более интенсивный рост бактерий всех видов отмечался на среде с нефтью.
Таблица 2. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Pseudomonas putida ВУ186 в жидкой синтетической среде в отношении нефти
Концентра-ция перфтордекалина,
%
|
Концентра-ция нефти,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилизации нефти,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
|
0
|
0
|
0,9
|
0,8
|
0,8
|
0,6
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,9
|
1,8
|
5,4
|
10,2
|
9,6
|
8,6
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
0,9
|
1,0
|
1,1
|
0,8
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,9
|
7,7
|
33,5
|
55,4
|
47,6
|
64,5
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
0,9
|
1,1
|
1,2
|
0,7
|
0,3
|
-
|
|
1
|
0,9
|
9,6
|
47,2
|
56,3
|
42,7
|
94,2
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Примечание. С целью большей наглядности результатов мы сочли целесообразным в настоящей таблице и в таблицах 3-8 привести только средние арифметические результаты по 4-6 определениям концентраций живых бактерий и степени утилизации ими нефтепродуктов. Во всех случаях степень отклонения единичного определения от средней арифметической не превышала 15 %.
Таблица 3. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Pseudomonas putida ВУ186 в жидкой синтетической среде в отношении мазута
Концентра-ция перфтор-декалина,
%
|
Концентра-ция мазута,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилиза-ции мазута,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
0,9
|
0,8
|
0,7
|
0,6
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,9
|
1,5
|
3,9
|
8,2
|
8,0
|
5,8
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
0,9
|
1,0
|
1,0
|
0,7
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,9
|
6,2
|
17,3
|
36,8
|
40,3
|
39,7
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
0,9
|
1,1
|
1,1
|
0,6
|
0,3
|
-
|
|
1
|
0,9
|
8,7
|
39,5
|
48,3
|
39,7
|
73,5
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Степень утилизации микроорганизмами нефти за четверо суток колебалась от 4,3 до 8,6%, мазута от 3,9 до 5,8%. Наибольшей биодеструктивной
активностью в отношении нефти и мазута обладала культура Pseudomonas putida ВУ186, наименьшей культура Bacillus subtilis ВУ 367. Культура Rhodococcus erythropolis ВУ 321 по степени утилизации нефти и мазута занимала среднее место.
Таблица 4. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Rhodococcus erythropolis ВУ 321 в жидкой синтетической среде в отношении нефти
Концентра-ция перфтор-декалина,
%
|
Концентра-ция нефти,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилизации нефти,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
0,8
|
0,8
|
0,7
|
0,6
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,8
|
1,5
|
3,9
|
8,2
|
8,0
|
6,3
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
0,8
|
1,0
|
1,0
|
0,6
|
0,4
|
-
|
|
1
|
0,8
|
6,2
|
17,3
|
36,8
|
40,3
|
39,7
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
0,8
|
1,1
|
1,1
|
0,5
|
0,3
|
-
|
|
1
|
0,8
|
8,7
|
39,5
|
48,3
|
39,7
|
73,5
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Таблица 5. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Rhodococcus erythropolis ВУ 321 в жидкой синтетической среде в отношении мазута
Концентра-ция перфтор-декалина,
%
|
Концентра-ция мазута,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилизациимазута,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
0,8
|
0,8
|
0,7
|
0,6
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,8
|
1,5
|
3,6
|
7,2
|
7,3
|
5,1
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
0,8
|
1,0
|
1,0
|
0,7
|
0,5
|
-
|
|
1
|
0,8
|
6,0
|
14,1
|
26,5
|
35,6
|
31,5
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
0,8
|
1,0
|
1,1
|
0,6
|
0,3
|
-
|
|
1
|
0,8
|
8,2
|
29,8
|
35,7
|
38,7
|
54,8
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Внесение в культуральную среду 1 и 5% перфтордекалина во всех случаях, сопровождалось значительным ускорением роста бактерий на синтетической среде с углеводородами нефти и мазута и существенным приростом абсолютного их количества начиная с первых суток культивирования с максимумом на третьи сутки роста. При этом концентрация бактерий через трое суток роста для культуры Pseudomonas putida ВУ186 достигала 5,63*10 9, что превышало их исходную концентрацию в 60 раз и аналогичный показатель для данного микроорганизма на среде без перфтордекалина в 5,5 раза.
Степень утилизации нефти в средах с содержанием 1 и 5% перфтордекалина у этого микроорганизма достигала 64,5 и 94,2%, соответственно, что в 8,6 и 11 раз превышало утилизацию нефти на среде без перфтордекалина.
Таблица 6. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Bacillus subtilis ВУ 367 в жидкой синтетической среде в отношении нефти
Концентра-ция перфтордекалина,
%
|
Концентра-ция нефти,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилизации нефти,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
1,1
|
1,2
|
0,9
|
0,9
|
0,7
|
-
|
|
1
|
1,1
|
1,7
|
3,5
|
7,4
|
7,2
|
4,3
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
1,1
|
1,1
|
1,2
|
1,0
|
0,7
|
-
|
|
1
|
1,1
|
3,7
|
11,5
|
27,5
|
33,7
|
23,9
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
1,1
|
1,2
|
1,1
|
0,7
|
0,6
|
-
|
|
1
|
1,1
|
6,1
|
18,4
|
29,8
|
32,5
|
41,6
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Таблица 7. Влияние перфтордекалина на рост и биодеструктивную активность культуры Bacillus subtilis ВУ 367 в жидкой синтетической среде в отношении мазута
Концентра-ция перфтордекалина,
%
|
Концентра-ция мазута,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
Степень утилизациимазута,
%
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
1,1
|
1,2
|
0,9
|
0,9
|
0,7
|
-
|
|
1
|
1,1
|
1,4
|
3,1
|
6,4
|
6,0
|
3,9
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
1
|
0
|
1,1
|
1,1
|
1,2
|
1,0
|
0,7
|
-
|
|
1
|
1,1
|
3,9
|
14,2
|
26,4
|
30,1
|
20,6
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
5
|
0
|
1,1
|
1,2
|
1,1
|
0,8
|
0,6
|
-
|
|
1
|
1,1
|
5,3
|
12,8
|
23,5
|
29,8
|
37,1
|
|
1
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0
|
|
Существенное увеличение скорости роста микроорганизмов, абсолютной их концентрации в среде и степени утилизации нефти и мазута наблюдался при добавлении в среду перфтордекалина для всех трех исследуемых культур микроорганизмов родов Pseudomonas, Rhodococcus и Bacillus. При этом прирост их показателей был примерно пропорционален их исходной биодеструктивной активности, определенной в отсутствие перфтордекалина.
Таблица 8. Влияние перфтордекалина на рост культуры Pseudomonas putida ВУ186 в жидкой синтетической среде с глюкозой
Концентра-ция перфтор-декалина,
%
|
Концентра-ция глюкозы,
%
|
Исходная концентра-ция живых микробов в см3 ´108
|
Концентрация живых бактерий в см3 в среде после:ч
роста на синтетической среде, ´108
|
|
|
24
|
48
|
72
|
96
|
|
0
|
0
|
0,9
|
0,8
|
0,8
|
0,6
|
0,5
|
|
1
|
0,9
|
10,9
|
26,3
|
19,2
|
19,6
|
|
1
|
0
|
0,9
|
1,0
|
1,1
|
0,8
|
0,5
|
|
1
|
0,9
|
16,7
|
48,2
|
24,3
|
18,4
|
|
5
|
0
|
0,9
|
1,1
|
1,2
|
0,7
|
0,3
|
|
1
|
0,9
|
45,3
|
37,1
|
19,7
|
14,5
|
|
При выращивании культуры Pseudomonas putida ВУ186 в жидкой синтетической среде, содержащей перфтордекалин и глюкозу вместо нефти или мазута, интенсивность роста бактерий резко возрастала. При этом пик концентрации живых клеток в культуральной среде с 5% перфтордекалина наблюдался уже через сутки, достигая 4,53*10 9 живых бактерий с последующим понижением этого показателя через двое, трое и четверо суток. В культуральной среде содержащей 1% перфтордекалина этом пик концентрации живых клеток наблюдался через двое суток культивирования с последующим интенсивным снижением этого показателя через трое и четверо суток. При росте Pseudomonas putida ВУ186 в жидкой синтетической среде с глюкозой вместо нефти или мазута, но не содержащей перфтордекалин, интенсивность роста бактерий менялась не в столь выраженной форме, однако она также превышала в несколько раз по скорости роста и интенсивности бионакопления аналогичные показатели для данного микроорганизма на средах с нефтью и мазутом. Потребность в кислороде у микроорганизмов растущих на среде с глюкозой составляет 0,7 граммов на 1 грамм абсолютной сухой массы; нефти и топочного мазута - до 3,3 граммов [4].
Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о возможности использования ПФОС для наработки биомассы микроорганизмов биодеструкторов с использованием дешевых синтетических сред с добавлением углеводородов нефтепродуктов в качестве источника углерода и энергии. Была показана возможность существенной интенсификации биодеструктивной активности грамположительных и грамотрицательных бактерий разных групп при добавлении в среду культивирования перфтордекалина в концентрациях от 1 до 5%.
Не вызывает сомнений, что интродукция во внешнюю среду активированной подобным образом микрофлоры позволит более эффективно восстанавливать ее экологическое равновесие в зоне хронических загрязнений нефтью и отходами нефтепроизводств, а также ликвидировать последствия техногенных катастроф, сопровождающихся массивным выбросом нефтепродуктов. Полученные данные существенно расширяют возможности использования перфторуглеродов для удаления разнообразных экотоксикантов биотехнологическими методами [7-9].
Литература
1. Использование биогенных добавок совместно с препаратом <Деворойл> для рекультивации нефтезагрязненных почв / Габбасова И.М., Сулейманов Р.Р., Бойко Т.Ф. и др. // Биотехнология. - 2002.- ©2. - С. 57 - 65.
2. Эффективные микроорганизмы-нефтедеструкторы для биологической рекультивации почв / Логинов О.Н., Бойко Т.Ф., Артемова С.А. и др.// Тез. докл. 1-го Международного Конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития (Москва, 14-18 октября 2002 г.). - М.:ЗАО Максима>, РХТУ им Д. И. Менделеева, 2002. - С.294.
3. Киреева Н.А. // Микробиологические процессы в нефтезагрязненных почвах. Уфа, 1994. - 171 с.
4. Интенсификация процессов очистки воды и почвы от нефтянных загрязнений в присутствии переносчиков кислорода / Курашов В. М., Емельянов В. М., Сахно Т. В. и др. // Тез. докл. 1-го Международного Конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития (Москва, 14-18 октября 2002 г.). - М.:ЗАО Максима>, РХТУ им Д. И. Менделеева, 2002. - С. 293 -294.
5. Иваницкий Г. Р. Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) //Сборник научных трудов НПФ <Перфторан>: Перфторорганические соединения в биологии и медицине. - Пущино: ПНЦ РАН, 2001. Вып. XI. - С. 4-48.
6. Бакулин М. К., Кучеренко А. С., Алпашкин Р. И. и др. Выделение и изучение прикладных свойств микроорганизмовнефтедеструкторов//Сборник материалов Всероссийской науч.-техн. конф. <Наука-производство-технологии-экология>, Киров, ЦДООШШ, 2003, Т.©3. С. 78-79.
7. Бакулин М. К., Кучеренко А. С., Золотарев А. Г., Кривошеина Н. А. Нужна ли <голубая кровь микроорганизмам>?// МВФ. Медицина. Фармация, 2003, © 2. - С. 7-11.
8. Бакулин М. К., Кучеренко А. С., Кривошеина Н. А. и др. Использование перфторуглеродов для интенсификации процессов микробной деградации нефти и нефтепродуктов//Сборник материалов Всероссийской науч.-техн. конф. <Наука-производство-технологии-экология>, Киров, ЦДООШШ, 2003, Т.©3. С. 80-81.
9. Бакулин М. К., Пименов Е. В., Дармов И. В. Зачем микроорганизмам <голубая кровь>//Сборник материалов Всероссийской науч.-техн. конф. <Наука-производство-технологии-экология>, Киров, ЦДООШШ, 2003, Т.©3. - С. 82-83.
Страница
|