Эксперименты проводились на 72 белых
беспородных крысах. В опыт брали молодых животных обоего пола, массой
от 280 до 350 г. Все животные были поделены
на три группы.
Животные 1-й группы служили контролем. Животным второй группы
производили резекцию печени в объеме 50%, а животным третьей группы - резекцию и введение
перфторана (ПФ) в дозе 1 мл. на 100г.массы тела.
Забои животных производились на 2, 3, 7 и 30 сутки. Состояние
соединительной ткани определяли по содержанию коллагеновых белков и объемной
плотности волокнистых структур печени.
Для исследования брались кусочки печени, из
которых после фиксации в 10% растворе нейтрального формалина путем
обезвоживания в спиртах восходящей концентрации изготавливались парафиновые
блоки. На срезах, окрашенных по Ван-Гизон, при увеличении 10´1,25´40 определяли объемную плотность
соединительнотканных волокнистых структур. Измерения проводили при помощи
адаптивной окулярной морфометрической сетки с равномерным шагом (25 узлов). Содержание
коллагеновых белков оценивали по количеству гидроксипролина, определяемого в
сухой обезжиренной печени после гидролиза в 6Н
HCl методом I. Bergman, R.
Loxsley в модификации А. А. Косых. Гидроксипролин является специфичной для коллагена аминокислотой.
Данный метод позволяет получить специфическое окрашивание при взаимодействии
гидроксипролина с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде в присутствии
окислителя- хлорамина Б и изопропилового спирта. Интенсивность окрашивания оценивали
спектрофотометрически.
При определении гидроксипролина у здоровых
крыс после резекции печени получены
следующие данные: через 2 суток после операции содержание гидроксипролина
снизилось на 36%
относительно исходного уровня, который составил 1,94±0,019мг%. К 3 и 7 суткам
данный показатель достоверно не изменился (1,26±0,14 и 1,34±0,12). К 30 суткам
содержание гидроксипролина приближалось к норме (1,66± 0,11), но оставалось
достоверно ниже последней (Рис.1).
При введении ПФ после резекции, на 2-е
сутки наблюдалось снижение гидроксипролина до 1,19±0,14, к 3-м суткам
оно несколько повысилось 1,65±0,23, к 7-м суткам произошло снижение содержания
гидроксипролина почти вдвое относительно предыдущего срока исследования. На
30-е сутки данный показатель составил 2,02±0,26, что достоверно не отличалось
от нормы.
При определении объемной плотности (ОП)
соединительнотканных волокнистых структур получены следующие результаты:
В группе резецированных животных ко 2-м
суткам произошло снижение ОП до 0,056±0,0014 усл.ед., что на 40% ниже нормы
(0,109±0,015). К 3-м и 7-м суткам данный показатель достоверно не изменился
относительно предыдущего срока исследования, а к 30-м суткам составил
0,097±0,007 усл.ед.
Во 2-й группе животных ко 2-м суткам ОП
составила 0,086±0,01, к 3-м практически не изменилось. На 7-е сутки
исследования ОП достоверно снизилась и составила 0,068±0,005 усл.ед. К 30-м
суткам данный показатель достоверно не отличался от нормы (Рис.2).
Таким образом, видно, что динамика как гидроксипролина, так и объемной плотности
волокнистых структур в каждой группе примерно совпадают, причем более
выраженное совпадение в группе животных, получающих перфторан.
Обращает на себя внимание выраженное
падение обоих показателей на 7-е сутки во второй группе. Ранее было показано [1] значительное увеличение
митотической активности гепатоцитов на 7-е сутки у крыс, которым вводилась
перфторуглеродная эмульсия, по сравнению с контролем (более чем в 10 раз). В то
же время в предыдущие сроки наблюдения (2-е и 3-и сутки) это увеличение было не
более, чем в 1,5 раза. Это свидетельствует о стимуляции перфтораном
паренхиматозных элементов печени. Это явление можно объяснить с позиций учения
Б.П. Солопаева и его школы (д.м.н. проф. А.А. Косых и др.) [2, 3], где выдвинута теория
корреляции взаимоотношений между интенсивностью пролиферативных процессов
паренхиматозных элементов и состоянием соединительной ткани. По-видимому, соединительная ткань может оказывать
тормозящее влияние на течение регенерации паренхиматозных элементов, вплоть до
полного подавления регенерации. В то же время интенсивная регенерация
паренхиматозных элементов может влиять
на состояние соединительной ткани, вызывая в некоторых случаях не только
задержку роста соединительной ткани, но и ее резорбцию, что и наблюдается в
настоящем исследовании.
Используемая литература:
1. Распутин П.Г. Применение эмульсий перфторорганических соединений в резекционной хирургии печени: Дис. : докт. мед. наук. - Пермь, 2000. - 340 с.
2. Солопаев Б.П. О коррелятивных взаимоотношениях между интенсивностью регенерации паренхиматозных элементов и состоянием соединительной ткани // Сб. трудов по исследованию обратимости острых и хронических изменений органов. - М,1962. - c. 172-180.
3. Косых А.А. Соединительная ткань печени в норме, при хроническом гепатите и циррозе в условиях регенерации: Дис. докт. мед. наук. - М., 1992. - 475 с.
Страница