БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ МЕДЛАЙН.РУ
Содержание журнала

Архив

Редакция
Учредители

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
"Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства"


Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
Институт теоретической и экспериментальной биофизики
Российской академии наук


ООО "ИЦ КОМКОН"

Адрес редакции и реквизиты

199406, Санкт-Петербург, ул.Гаванская, д. 49, корп.2

ISSN 1999-6314
Клиническая медицина » Хирургия • Трансфузиология

Том: 12
Статья: « 101 »
Страницы:. 1235-1247
Опубликована в журнале: 25 ноября 2011 г.

English version

Размораживание и отмывка стволовых клеток пуповинной крови- спорные моменты и собственный опыт.

Селиванов Е.А1., Смолянинов А.Б.2,3, Иволгин Д.А.2,3, Коровина К.В.3, Хрупина А.С.2,3

1-ФГУ РосНИИГТ ФМБА РФ- Санкт-Петербург, Россия, 2-я Советская ул., 8, (812) 274-56-38, bloodscience@mail.ru
2- НИИ Клеточных Технологий СПбМАПО ФАЗСР- Санкт-Петербург, Россия,
199106, Большой пр. В.О., 85, (812) 777-02-06, stemcellbank@inbox.ru
3- Покровский Банк Стволовых Клеток- Санкт-Петербург, Россия,


Резюме
Сегодня не существует унифицированных протоколов для замораживания, размораживания и подготовки к трансплантации стволовых клеток ПК. Мы исследовали 31 образец концентрата лейкоцитарной фракции ПК- 11 размороженных образцов обрабатывали аппаратным методом на Sepax S100 (Biosafe, Швейцария) (группа 1), а 11 образцов обрабатывали ручным методом на центрифуге (группа 2), 9 образцов без отмывки от ДМСО составили группу сравнения (группа 3). Во всех образцах определялось количество ядерных клеток, количество и жизнеспособность CD34+/CD45+ клеток в концентрате лейкоцитарной фракции до замораживания, после размораживания и отмывки клеток от криопротектора двумя способами: на аппарате Sepax S-100 и ручным методом на центрифуге. Медиана выхода CD34/45+ в группе 1, 2 и 3 составила 92±9%, 81±7% и 94±6%, соответственно, медиана выхода ядерных клеток в группах 1, 2 и 3 составила 93±3%, 85±4% и 94±3%, соответственно, жизнеспособность клеток после размораживания в группах 1, 2, 3 составила 94,9±2,4%, 93,7±2,2% и 94,4±2,1% соответственно. Из полученных результатов можно сделать вывод о том, что способ размораживания и последующей обработки образца ПК не влияет на показатели жизнеспособности CD34/45+ клеток, а наибольший процент потери ядерных и CD34/45+ клеток (15% и 19%, соответственно) наблюдается в группе 2, в то время как показатели клеточного концентрата, в группах 1 и 3 существенно не различались. Таким образом, при наличии соответствующего технического оснащения, отмывка концентрата стволовых клеток пуповинной крови от криопротектора с помощью автоматической системы не ведет к ухудшению качественных показателей образца ПК.


Ключевые слова
криоконсервация, пуповинная кровь, стволовые клетки, ДМСО, Sepax S-100




(статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader)



открыть статью в новом окне

Список литературы

1 Broxmeyer H.E. Cord Blood Transplantation: A Mini Review Celebrating the 20th Anniversary of the First Cord Blood Transplant // The Hematologist.-2009.-№ 6(1).-P.7.


2 Broxmeyer H.E., Smith FO. Cord Blood Hematopoietic Cell Transplantation // Appelbaum F.R., Forman S.J., Negrin R.S., Blume K.G.. Thomas’ Hematopoietic Cell Transplantation- 4th edn. - Wiley-Blackwell, West Sussex, United Kingdom, - 2009.- Section 4,- Ch. 3,- P. 559–576.


3 Gluckman E., Broxmeyer H.E., Auerbach A.D., et al. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling // N Engl J Med.-1989.- № 321(17).- P.1174–1178.


4 Broxmeyer H.E., Douglas G.W., Hangoc G, Cooper S, Bard J, English D et al. Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem/progenitor cells // Proc Natl Acad Sci USA.- 1989.- № 86(10).- P. 3828–3832.


5 Suzanne M.W., Austin E., Armitage S., Cryopreservation of Hematopoietic Stem/Progenitor Cells for Therapeutic Use // Day J.G., Stacey G.N.. Cryopreservation and freeze-drying protocols - 2nd edn.- Humana Press Inc. Totowa, New Jersey,- 2007.- Ch. 17,- P. 237-259


6 Hubel A. et al., Cryopreservation of cord blood after liquid storage // Cytotherapy.- 2003,- № 5(5).- P.370-376.


7 Hubel A. et al., Liquid storage, shipment, and cryopreservation of cord blood // Transfusion.- 2004.- № 44(4).- P. 518-525.


8 Shlebak A.A. et al., Optimal timing for processing and cryopreservation of umbilical cord haematopoietic stem cells for clinical transplantation // Bone Marrow Transplantation.- 1999.- № 23(2).- P.131–136


9. Lovelock, J.E., Bishop M.W.H.. Prevention of freezing damage to living cells by dimethyl sulphoxide // Nature.- 1959.- № 183(4672).- P.1394–1395.


10. Hunt C.J., Armitage S.E., Pegg D.E.. Cryopreservation of umbilical cord blood: 2. Tolerance of CD34(+) cells to multimolar dimethyl sulphoxide and the effect of cooling rate on recovery after freezing and thawing // Cryobiology.- 2003.- № 46(1).-P.76–87.


11. Hunt C.J., Armitage S.E., Pegg D.E.. Cryopreservation of umbilical cord blood: 2. Tolerance of CD34(+) cells to multimolar dimethyl sulphoxide and the effect of cooling rate on recovery after freezing and thawing // Cryobiology.- 2003.- № 46(1).-P. 61–75.


12 Chaloupka J.C., Vinuela F., Vinters H.V. et al. 1.Technical feasibility and histopathologicstudies of ethylene vinyl copolymer (EVAL) using a swine endovascular embolization model // Am J Neuroradiol.- 1994.- № 15(6).- P.1107–1115. Chaloupka J.C., Huddle D.C., Alderman J. et al. 2. A reexamination of the angiotoxicity of superselective injection of DMSO in the swine rete embolization model // Am J Neuroradiol.- 1999.- № 20(3).- P. 401–410.


13 Zambelli A., Poggi G., Da Prada G. et al.. Clinical toxicity of cryopreserved circulating progenitor cells infusion // Anticancer Res.- 1998.- № 18(6B).- P. 4705–4708.


14 Davis J.M., Rowley S.D., Braine H.G. et al.. Clinical toxicity of cryopreserved bone marrow graft infusion // Blood.- 1990.- № 75(3).- P. 781–786.


15 Zenhausern R., Tobler A., Leoncini L. et al.. Fatal cardiac arrhythmia after infusion of dimethyl sulfoxide-cryopreserved hematopoieticstem cells in a patient with severe primary cardiac amyloidosis and end-stage renal failure // Ann Hematol.- 2000.- № 79(9).- P. 523–526.


16 Benekli M., Anderson B., Wentling D. et al.. Severe respiratory depression after dimethyl sulphoxide-containing autologous stem cell infusion in a patient with AL amyloidosis // Bone Marrow Transplant.- 2000.- № 25(12).- P.1299–1301.


17 Miniero R., Vai S., Giacchino M. et al.. Severe respiratory depression after autologous bone marrow infusion // Haematologica.- 1992.- № 77(1).- P. 98–99.


18 Corso S., Vukelja S.J., Wiener D. et al. Diffuse alveolar hemorrhage following autologous bone marrow infusion // Bone Marrow Transplant.- 1993.- № 12(3).- P. 301–303.


19 Higman M.A., Port J.D., Beauchamp Jr N.J. et al. Reversible leukoencephalopathy associated with re-infusion of DMSO preserved stem cells // Bone Marrow Transplant.- 2000.- № 26(7).- P. 797–800.


20 Ferrucci P.F., Martinoni A., Cocorocchio E. et al. Evaluation of acute toxicities associated with autologous peripheral blood progenitor cell reinfusion in patients undergoing high-dose chemotherapy // Bone Marrow Transplant.- 2000.- № 25(2).- P.173–177.


21 Hequet O., Dumontet C., El Jaafari-Corbin A. et al. Epileptic seizures after autologous peripheral blood progenitor infusion in a patient treated with high-dose chemotherapy for myeloma // Bone Marrow Transplant.- 2002.- № 29(6).- P. 544.


22 Windrum P., Morris T.C.. Severe neurotoxicity because of dimethyl sulphoxide following peripheral blood stem cell transplantation // Bone Marrow Transplant.- 2003.- № 31(4).- P. 315.


23 Hoyt R., Szer J., Grigg A.. Neurological events associated with the infusion of cryopreserved bone marrow and/or peripheral blood progenitor cells // Bone Marrow Transplant.- 2000.- № 25(12).- P.1285–1287.


24 Gomez S., Nagler A., Naparstek E., Slavin S.. Transient elevation of serum lactic dehydrogenase following autologous bone marrow transplantation // Bone Marrow Transplant.- 1991.- № 7(6).- P. 487–488.


25 Burger J., Gilmore M.J., Jackson B. et al. Acute haemoglobinaemia associated with the reinfusion of bone marrow buffy coat for autologous bone marrow transplantation // Bone Marrow Transplant.- 1991.- № 7(4).- P. 322–324.


26 Galmes A., Besalduch J., Bargay J. et al. Long-term storage at -80 degrees C of hematopoietic progenitor cells with 5-percent dimethyl sulfoxide as the sole cryoprotectant // Transfusion.- 1999.- № 39(1).- P. 70–73.


27 Bakken A.M., Bruserud O., Abrahamsen J.F.. No differences in colony formation of peripheral blood stem cells frozen with 5 or 10% dimethyl sulfoxide // J Hematother Stem Cell Res.- 2003.- № 12(3).- P. 351–358.


28 Halle P., Tournilhac O., Knopinska-Posluszny W. et al.. Uncontrolled-rate freezing and storage at -80 degrees C, with only 3.5-percent DMSO in cryoprotective solution for 109 autologous peripheral blood progenitor cell transplantations // Transfusion.- 2001.- № 41(5).- P. 579–580.


29 Syme R., Bewick M., Stewart D. et al. The role of depletion of dimethyl sulfoxide before autografting: on hematologic recovery, side effects, and toxicity // Biol Blood Marrow Transplant.- 2004.- № 10(2).- P.135–141.


30 Martino M., Morabito F., Messina G. et al.. Fractionated infusions of cryopreserved stem cells may prevent DMSO-induced major cardiac complications in graft recipients // Haematologica.- 1996.- № 81(1).- P. 59–61.


31 Windrum P. et al.. Variation in dimethyl sulfoxide use in stem cell transplantation: a survey of EBMT centres // Bone Marrow Transplantation.- 2005.- № 36(7).- P. 601–603


32 Rubinstein P. et al.. Processing and cryopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution // Proc. Nati. Acad. Sci. USA.- 1995.- № 92(22).- P. 10119-10122.


33 Meyer T.P. et al.. Analysis and cryopreservation of hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood // Cytotherapy.- 2006.- 8(3).- P. 265-276.


34 Laroche V. et al.. Cell loss and recovery in umbilical cord blood processing: a comparison of postthaw and postwash samples // Transfusion.- 2005.- № 45(12).- P. 1909-1916.


35 Syme R. et al. The Role of Depletion of Dimethyl Sulfoxide before Autografting: On Hematologic Recovery, Side Effects, and Toxicity // Biology of Blood and Marrow Transplantation.- 2004.- № 10(2).- P.135-141.


36 Yang H., Zhao H., Acker J. P., Liu J.Z., Akabutu J., McGann L.E.. Effect of dimethyl sulfoxide on post-thaw viability assessment of CD45+ and CD34+ cells of umbilical cord blood and mobilized peripheral blood // Cryobiology.- 2005.- № 51(2).- P. 165–175.


37 Nagamura-Inoue T. et al.. Wash-out of DMSO does not improve the speed of engraftment of cord blood transplantation: follow-up of 46 adult patients with units shipped from a single cord blood bank // Transfusion.- 2003.- № 43(9).- P.1285–1295.


38 Hahn T. et al.. Use of nonvolume-reduced (unmanipulated after thawing) umbilical cord blood stem cells for allogeneic transplantation results in safe engraftment // Bone Marrow Transplantation.- 2003.- № 32(2).- P. 145–150.


39 Rodríguez L. et al.. Washing of cord blood grafts after thawing: high cell recovery using an automated and closed system // Vox Sang.- 2004.- № 87(3).- P.165-72.


40 Spurr E.E. et al.. Cryopreserved human haematopoietic stem cells retain engraftment potential after extended (5–14 years) cryostorage // Cryobiology.- 2002.- № 44(3).- P. 210-217


41 Mugishima H. et al.. Effects of long-term cryopreservation on hematopoietic progenitor cells in umbilical cord blood // Bone Marrow Transplantation.- 1999.- № 23(4).- P. 395–396.


42 Broxmeyer H.E.. High-efficiency recovery of functional hematopoietic progenitor and stem cells from human cord blood cryopreserved for 15 years // Proc. Nati. Acad. Sci. USA.- 2003.- № 100(2).- P. 645-650.


43 Broxmeyer H.E.. Experimental basis of cord blood transplantation // Bone Marrow Transplantation.- 2009.- № 44(10).- P. 627–633.


44 Scaradavou A. et al.. "Age" of the Cord Blood (CB) Unit: Impact of Long-Term Cryopreservation and Storage on Transplant Outcome// Blood (ASH Annual Meeting Abstracts).- 2007.- № 110(11).- Abstract 2033.


45 Chow R. et al. The Effect of Storage Time on Clinical Outcomes of Plasma Depleted (PD) Cord Blood (CB) Transplantation // Blood (ASH Annual Meeting Abstracts).- 2008.- № 112(11).- Abstract 4128.